細(xì)胞污染的常見類型

細(xì)胞培養(yǎng)

細(xì)胞培養(yǎng)過程中即使我們?cè)傩⌒囊硪恚€是會(huì)在不經(jīng)意間出現(xiàn)細(xì)胞污染的情況，導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)無法繼續(xù)進(jìn)行，可能是準(zhǔn)備已久的實(shí)驗(yàn)，一下子又回到了起點(diǎn)。本期就細(xì)胞污染的常見類型簡(jiǎn)單向大家介紹一下。

實(shí)驗(yàn)室細(xì)胞培養(yǎng)過程中的污染物主要有兩大類：化學(xué)污染和生物污染物。

一、化學(xué)污染

主要有培養(yǎng)基、PBS、血清和胰酶等試劑中的雜質(zhì)，內(nèi)毒素，洗滌劑殘留等。因此許多試劑在使用前需要過濾，清洗的物品一定要用超純水多清洗幾次并高溫高壓滅菌后使用。

二、生物污染

01 細(xì)菌污染

主要有白色葡萄球菌，大腸桿菌，假單孢菌、枯草桿菌等；細(xì)胞被污染后培養(yǎng)基會(huì)很快變黃變渾濁，在顯微鏡下可觀察到細(xì)胞間有細(xì)小菌體移動(dòng)，在數(shù)小時(shí)內(nèi)會(huì)出現(xiàn)細(xì)胞脫落漂浮，培養(yǎng)液中呈細(xì)沙狀。這種污染通常是操作不規(guī)范或無菌措施不到位等引起的。

02 霉菌污染

常見的有白念珠菌、酵母菌、黑曲霉、孢子菌等；細(xì)胞污染后可明顯觀察到呈現(xiàn)串珠狀的白色或黃色漂浮物，顯微鏡下可見絮狀交錯(cuò)的菌絲或串珠狀的透明菌團(tuán)生長(zhǎng)在細(xì)胞之間，污染速度較慢，培養(yǎng)基依舊清澈，后期會(huì)在細(xì)胞間出現(xiàn)很多清晰珊瑚狀物，逐漸會(huì)長(zhǎng)出黑色絲狀物。這種污染通常也是操作不規(guī)范或無菌措施不到位等引起的。

03 支原體污染

細(xì)胞被支原體污染后，培養(yǎng)液可不發(fā)生渾濁，短期內(nèi)細(xì)胞沒有明顯的病理變化，細(xì)微變化也可由于傳代、換液而被緩解，因此不易被發(fā)現(xiàn)。只有當(dāng)污染嚴(yán)重時(shí)才影響細(xì)胞增殖，甚至從培養(yǎng)器皿脫落。支原體可以與宿主細(xì)胞形成一個(gè)共生關(guān)系，使污染不斷擴(kuò)大。主要來源于是已感染支原體細(xì)胞之間的交叉污染，支原體感染的血清和胰酶等。在情況較輕時(shí)可使用支原體清除劑。

04 黑膠蟲污染

污染后培養(yǎng)液不會(huì)渾濁，在高倍鏡下可觀察到細(xì)胞間有黑色顆粒在原地進(jìn)行“布朗運(yùn)動(dòng)”，像小蟲游來游去。隨著污染加重，被污染的細(xì)胞生長(zhǎng)緩慢，細(xì)胞狀態(tài)差，空泡化嚴(yán)重，甚至還可能導(dǎo)致細(xì)胞形態(tài)的改變。污染源主要來自于血清，如果出現(xiàn)污染，更換血清。

05 病毒污染

被污染的細(xì)胞不會(huì)產(chǎn)生形態(tài)變化及細(xì)胞病理現(xiàn)象，培養(yǎng)液清澈不混濁，少部分病毒會(huì)造成細(xì)胞變圓、腫脹，脫落。病毒可能來源于血清。

06 細(xì)胞交叉污染

在顯微鏡下可觀察到部分細(xì)胞形態(tài)與所培養(yǎng)的細(xì)胞形態(tài)有明顯差異，可能是兩種或兩種細(xì)胞以上的實(shí)驗(yàn)同時(shí)進(jìn)行，操作不當(dāng)，使實(shí)驗(yàn)耗材、試劑等混用而易造成的污染。

細(xì)胞培養(yǎng)中每次出現(xiàn)污染，不僅要丟棄污染的細(xì)胞、檢查各種試劑，還需要對(duì)培養(yǎng)箱進(jìn)行徹底的殺菌消毒，我們致力研發(fā)的二氧化碳細(xì)胞培養(yǎng)箱配備高溫滅菌功能（可選“濕熱滅菌”），接近過度滅殺（1012）的標(biāo)準(zhǔn)要求，歡迎咨詢。

（發(fā)布于：2022-08-29）