簡(jiǎn)述哺乳動(dòng)物表達(dá)系統(tǒng)——CHO細(xì)胞
隨著生物醫(yī)藥的飛速發(fā)展，哺乳動(dòng)物細(xì)胞已被廣泛用于重組蛋白、疫苗、抗癌試劑及其他臨床相關(guān)的藥物的生產(chǎn)中。
現(xiàn)有的哺乳動(dòng)物表達(dá)系統(tǒng)包括中國(guó)倉(cāng)鼠卵巢（CHO）細(xì)胞，嚙齒動(dòng)物細(xì)胞系（ＮSO, BHK, SP2/0）和人類細(xì)胞系（ＨEK293細(xì)胞, PER.C6, CAP, 纖維瘤），其中CHO細(xì)胞和ＨEK293細(xì)胞占據(jù)重要地位。
本期主要簡(jiǎn)述CHO細(xì)胞的發(fā)展及蛋白表達(dá)系統(tǒng)的特點(diǎn)
1、CHO細(xì)胞蛋白表達(dá)系統(tǒng)特點(diǎn)
（1）能在無(wú)血清、化學(xué)成分限定的培養(yǎng)基中懸浮培養(yǎng)，穩(wěn)定生長(zhǎng)，（快速、高產(chǎn)、安全）；
（2）在對(duì)人類致病性病毒方面具有一定的安全性；
（3）能夠表達(dá)與人相似的翻譯后修飾；
（4）較少分泌內(nèi)源性蛋白，降低下游流程的難度；
（5）易于基因調(diào)控（DHFR 或 GS缺陷型）；
（6）可瞬轉(zhuǎn)或穩(wěn)轉(zhuǎn)表達(dá)蛋白。
2、CHO細(xì)胞的發(fā)展
CHO細(xì)胞來(lái)自于1958年由Puck分離的具有無(wú)性繁殖性和自發(fā)永生性的中華倉(cāng)鼠卵巢細(xì)胞。CHO細(xì)胞主要包括CHO-K1, CHO-S，CHO-DXB11和CHO-DG44。
CHO-K1
CHO-K1是未經(jīng)改造的野生型CHO細(xì)胞。1968年存放在ATCC中，即現(xiàn)在的CHO-K1（ATCC CCL-61）。1985年分離出一個(gè)亞克隆保存在ECACC (85051005)。最初的CHO-K1細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中需要添加血清，并且是貼壁生長(zhǎng)的。2002年Lonza公司將CHO-K1細(xì)胞馴化至無(wú)血清培養(yǎng)基中懸浮培養(yǎng)，建立了CHOK1 SV細(xì)胞，主要和GS篩選系統(tǒng)組合使用，在GS篩選系統(tǒng)中，目的基因和單拷貝的GS基因被運(yùn)送到細(xì)胞中。穩(wěn)定的細(xì)胞在不含谷氨酸的培養(yǎng)基中進(jìn)行篩選，同時(shí)可以添加MSX增加篩選強(qiáng)度，最終達(dá)到篩選高表達(dá)的細(xì)胞株的目的。2006年Merck將CHO-K1細(xì)胞株經(jīng)懸浮馴化至化學(xué)限定培養(yǎng)基中，得到CHOZN CHOK1（Merck，2006）細(xì)胞株。
CHO-S
1971年多倫多大學(xué)的Thompso馴化出了一株可用于懸浮培養(yǎng)的CHO細(xì)胞，能夠在生物反應(yīng)器中使用該細(xì)胞系進(jìn)行更大規(guī)模的培養(yǎng)，1980年Gibco公司將此細(xì)胞馴化至CD CHO培養(yǎng)基中，建庫(kù)并以CHO-S名稱進(jìn)行推廣。
CHO-DXB11
哥倫比亞大學(xué)的Urlaub和Chasin生成了一個(gè)DHFR位點(diǎn)缺失，另一個(gè)只包含了一個(gè)錯(cuò)義突變的CHO細(xì)胞。DHFR缺陷型菌株不能生長(zhǎng)，除非用DHFR的功能性拷貝轉(zhuǎn)染或在培養(yǎng)基中補(bǔ)充胸苷。因此，將功能性 DHFR基因連接到感興趣的基因（GOI），轉(zhuǎn)染CHO-DXB11細(xì)胞能夠通過(guò)在不含胸苷的培養(yǎng)基中培養(yǎng)細(xì)胞來(lái)選擇僅攜帶GOI的細(xì)胞。
CHO-DG44
Urlaub和Chasin構(gòu)建了一個(gè)完全缺失兩個(gè)DHFR位點(diǎn)的CHO細(xì)胞系。CHO-DXB11細(xì)胞可以自發(fā)地恢復(fù)DHFR酶活性，使得選擇不可能。因此他們將DHFR等位基因雙敲除得到CHO-DG44細(xì)胞株， 通過(guò)完全刪除 DHFR 位點(diǎn)消除了這一問(wèn)題，使 GOI 選擇始終成為可能，當(dāng)細(xì)胞被MTX處理后可以成功的擴(kuò)增轉(zhuǎn)染基因。
細(xì)胞培養(yǎng)搖床是工業(yè)中細(xì)胞培養(yǎng)所必須的，細(xì)胞生長(zhǎng)的狀態(tài)不僅取決于細(xì)胞自身的狀態(tài)、營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的成分，外界的環(huán)境也是十分的重要，如搖床的轉(zhuǎn)速，溫度，二氧化碳濃度等。我司一直致力于自主研發(fā)細(xì)胞培養(yǎng)所需的振蕩器——疊加式磁驅(qū)振蕩器：
【疊加式磁驅(qū)振蕩器】
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◆ 疊加式磁驅(qū)振蕩器使用磁力驅(qū)動(dòng)機(jī)芯，保持高精度振蕩，緩啟緩?fù)＃ＷC細(xì)胞培養(yǎng)的穩(wěn)定存活，還具備超靜音運(yùn)行，發(fā)熱量低，無(wú)皮帶驅(qū)動(dòng)，潔凈度高，壽命長(zhǎng)等特點(diǎn)。
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◆ 采用進(jìn)口雙通道紅外CO2傳感器，結(jié)合高精度電磁閥控制，及內(nèi)部氣流合理布局，保證CO2濃度精準(zhǔn)均勻。
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◆ 可選配先進(jìn)的Wifi監(jiān)控系統(tǒng)，可多臺(tái)手機(jī)同時(shí)遠(yuǎn)程無(wú)線監(jiān)控同一機(jī)器，及時(shí)獲取無(wú)進(jìn)氣等報(bào)警信息以快速處理緊急情況，安全保護(hù)培養(yǎng)細(xì)胞等。
（發(fā)布于：2022-10-18）