簡述哺乳動物表達系統(tǒng)——HEK293細胞
隨著生物醫(yī)藥的飛速發(fā)展，哺乳動物細胞已被廣泛用于重組蛋白、疫苗、抗癌試劑及其他臨床相關(guān)的藥物的生產(chǎn)中。
現(xiàn)有的哺乳動物表達系統(tǒng)包括中國倉鼠卵巢（CHO）細胞，嚙齒動物細胞系（ＮSO, BHK, SP2/0）和人類細胞系（ＨEK293細胞, PER.C6, CAP, 纖維瘤），其中CHO細胞和ＨEK293細胞占據(jù)重要地位。
本期主要簡述HEK293細胞的發(fā)展及蛋白表達系統(tǒng)的特點
1、HEK293細胞蛋白表達系統(tǒng)特點
（1）能在無血清的培養(yǎng)基中懸浮培養(yǎng)，穩(wěn)定生長，大規(guī)模表達；
（2）轉(zhuǎn)染效率高；
（3）表達蛋白結(jié)構(gòu)最接近其在人體內(nèi)構(gòu)象；
（4）在培養(yǎng)體系中能夠快速增長，高密度培養(yǎng)。
2、HEK293細胞的發(fā)展
HEK293細胞來源于人類胚胎腎細胞中。在人的胚胎腎細胞中轉(zhuǎn)入人5型腺病毒DNA片段，得到的人胚腎細胞永生化細胞系即為HEK293細胞。
293T細胞
HEK293細胞中轉(zhuǎn)入SV40T-antigen基因形成的高轉(zhuǎn)衍生株成為293T細胞。含SV40ori的質(zhì)粒能夠在該細胞系中顯著擴增，從而促進表達載體的擴增，促進蛋白的表達，因此被廣泛應用于逆轉(zhuǎn)錄病毒生產(chǎn)、基因表達和蛋白表達。在293T細胞中共轉(zhuǎn)染入pBND和pZAP質(zhì)粒，獲得的具有G418耐受的細胞系即為293T/17細胞系。該細胞系具有高轉(zhuǎn)染性的特點。轉(zhuǎn)入EBV基因則形成293T/17 SF細胞系，該細胞系主要用于細胞的瞬時轉(zhuǎn)染及蛋白表達。
293H細胞
將HEK293細胞馴化后得到的能夠在無血清培養(yǎng)體系下快速生長、具有高轉(zhuǎn)染效率及高效蛋白表達性能的細胞系。該細胞系具有較好的貼附性，常用于噬菌斑檢測和蛋白的表達。例如293E細胞是在293-H細胞中插入EBNA-1基因的細胞系，該基因能夠穩(wěn)定表達EBV病毒的EBNA1蛋白。含有EBV復制起點（oriP）的重組表達質(zhì)粒，能夠在H293E細胞中復制，并實現(xiàn)蛋白的高效表達。而插入截短過后的EBNA-1基因得到293-6E細胞，該細胞能夠在無血清培養(yǎng)基中高表達生產(chǎn)蛋白及病毒載體。
293F細胞
能夠在無血清培養(yǎng)基中快速生長并高效表達蛋白的野生型293細胞系。在293F細胞中轉(zhuǎn)染pCMVSPORT6TAg.Neo 質(zhì)粒的得到293FT細胞，該細胞穩(wěn)定表達SV40大T抗原，并且促進最適病毒產(chǎn)物的產(chǎn)生，可用于高滴度慢病毒載體的生產(chǎn)。當Flp-InTMT-RETM293細胞轉(zhuǎn)染了ecotropic receptor質(zhì)粒和MAPPIT(mammalian protein-protein interaction trap)報告質(zhì)粒稱為293FTM細胞，主要用于蛋白互作的篩選。
293S細胞
被馴化成能夠懸浮培養(yǎng)且能夠耐受低鈣離子培養(yǎng)條件的293細胞系。在293S細胞轉(zhuǎn)染pcDNA6/TR質(zhì)粒得到耐受蓖麻毒素的細胞系即為293SG。該細胞系可用于四環(huán)素誘導的蛋白表達研究以及同源的N-糖基化蛋白的表達。293SGGD細胞則是在293SG轉(zhuǎn)染pcDNA3.1-zeo-STendoT質(zhì)粒得到的細胞，其主要用于糖基化工程研究。
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（發(fā)布于：2022-11-09）